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VivaCell胎牛血清50ml迷你装全新上市
点击次数:1800 发布日期:2020-6-15  来源:本站 本站原创,转载请注明出处

血清是细胞培养试剂中最普遍的试剂之一,之前我们已经介绍过了有关血清的一些小知识(血清知识大盘点),那么今天我们将继续了解有关血清沉淀与血清热灭活的相关知识~

血清沉淀是否会影响细胞生长?如何避免?热灭活血清如何处理?有必要对血清进行热灭活吗?
 

血清沉淀

1. 血清沉淀是什么?   

血清中经常会出现肉眼可见的沉淀,其成分有多种类型,产生的原因有很多。主要有纤维蛋白(絮状沉淀)、甲胎蛋白、脂蛋白、冷凝集素、玻粘连蛋白、磷酸钙(显微镜下小黑点沉淀)、胆固醇等。

  • 纤维蛋白(Fibrin)

    血清中肉眼可见的沉淀物大多属于这一类型。由于在生产过程中,血清采集、过滤(3 次 0.1μm过滤)和灌装处理都是在低温条件下快速完成, 此时血清中纤维蛋白原(Fibrinogen)处于溶解状态。但在解冻之后, 血清中纤维蛋白原往往会发生凝集,形成肉眼可见的沉淀。

  • ▲ 纤维蛋白沉淀图

  • 磷酸钙(Calcium Phosphate)

    这是一种常见的沉淀成分,通常会造成血清出现云雾状浑浊。当血清在 37℃保存时,这种现象尤其明显,在倒置显微镜下可观察到小黑点的存在。这些小黑点在布朗运动的作用下四处游动,常被误认为是微雷竞技下载不了污染。

  • 其他成分(Other)

    血清中的其他成分也会形成沉淀,例如胆固醇形成的油脂滴和其他蛋白沉淀等。


  • 2. 沉淀是如何形成的?            

    造成沉淀的主要原因是温度的改变、热灭活、反复冻融、长期储存于2-8℃或者室温。


    3. 血清沉淀会影响细胞培养吗?

    我们在出厂前都会对血清进行一系列质检测试,确保血清质量达到严格标准。血清测试和细胞培养经验也表明,其沉淀成分不会影响血清作为细胞培养添加物的表现。这一点得到了众多用户和其他血清供应商的肯定。解冻之后, 血清中纤维蛋白原往往会发生凝集,形成肉眼可见的沉淀。

    磷酸钙颗粒经常会被当成微雷竞技下载不了污染而引发不必要的担忧。一般情况下,当操作人员融化血清后注意到有雾状浑浊时,常将其存放在 4℃冰箱中观察,并考虑接下来是否继续使用。但这样会使沉淀进一步增多,反而会使血清更加浑浊,进而误以为存在血清污染。并且,在倒置显微镜下,可在血清中观察到小黑点(磷酸钙颗粒的布朗运动),更容易使人误以为存在微雷竞技下载不了污染。 

    为防止这类误解的产生,我们不建议用户培养血清来验证是否存在污染,而是将血清直接接种在细菌培养基上进行培养,以观察是否有细菌的增殖。并且,进行革兰氏染色,并在油镜(100 X 10 倍)下观察可直接确认是否存在微雷竞技下载不了污染。

    VivaCell血清采用国际先进标准,经过3次0.1μm过滤,有效去除霉菌、细菌、酵母菌、支原体等,并通过ISO13485质量体系认证。


    4. 如何避免血清沉淀                
  • 正确解冻

    首先,应按照逐步解冻的方式正确解冻血清:从-20℃取出后,置于4℃冰箱缓慢解冻,最后置于室温完成解冻。如果直接从-20℃拿到室温或37℃水浴解冻,则非常容易产生沉淀。在解冻过程中,请注意,应时不时缓慢摇晃血清瓶,可减少沉淀的产生。为避免反复冻融,建议您将血清分装使用。 

  • 使用和保存注意事项

    血清沉淀很难预测和避免,出现沉淀后也无需担忧,这并不会影响血清的品质。已知血清沉淀在以下条件下会有增多的可能:

    1) 热灭活;

    2) 37℃培养;

    3) 反复冻融;

    4) 伽马射线照射; 

    5) 2-8℃长期保存; 

    6) 长期保存于可自动化霜的冰箱中(温度不稳定);

  • 血清沉淀的形成机理多种多样,具体的机理尚不十分明确。我们尚不能准确预测和控制血清沉淀的产生。目前市面上所有品牌的血清产品都存在沉淀现象,这一点可以在各品牌官方网站上关于沉淀问题的声明上得到证实。


  • 5. 有沉淀时如何处理?             

    我们建议您采用2000rpm离心5分钟,取上清使用就好,比过滤方便,不需要另外准备滤芯和针筒,且不容易污染。

    血清产品中出现沉淀属于正常现象,不会影响到血清的品质,对细胞培养也不会产生影响,大家可以放心使用,若不立即使用,血清应保存在-20℃以下。
     
    血清热灭活


    1. 为何会有热灭活血清呢?

    加热可以灭活补体系统。启动的补体系统参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,启动淋巴细胞和巨噬细胞活化。在免疫学研究中,培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。


    2. 血清热灭活是否必要?

    血清热灭活的步骤在1970年代就已建立,至今成为很多实验室的常规血清前处理步骤;但许多先前认为必须热灭活的原因,却早已经不再成立:

  • 去除支原体污染?
    早期血清加工使用的450nm滤膜,早已被100nm滤膜取代;且随着加工技术的创新及严格的监控,血清产品早已没有支原体污染的疑虑。

  • 去除补体等对热敏感的物质? 
    胎牛血清中含有的补体仅为成年牛血清5-50%,而C3(补体中引起免疫反应的主成分)在胎牛血清中则几乎不能检出,直接使用血清对大多数的细胞株没有负面影响。

  • 实验显示,大多数的细胞不需要热灭活血清,对于非必须的细胞来说血清灭活对于细胞生长只有微小甚至无任何作用,还可能造成生长速率降低,沉淀物还会显著增多,不利于细胞观察。因此,若非必须,不需要对血清进行灭活处理。


    3. 血清热灭活对细胞生长有帮助吗?

    细胞雷竞技下载不了学家比较了正常热灭活胎牛血清对各种细胞株的生长能力影响,发现11株细胞中,热灭活对6 株细胞有负面影响(红)、3株无影响(绿)、2株有微弱正面改善(黄)。

    ▲ 使用未灭活或灭活血清的细胞生长状况

    所以,在正常操作下,热灭活通常对“细胞生长”没有明显的促进作用,反而会破坏血清内生长因子,维生素,氨基酸等珍贵物质,降低细胞增殖速度。


    4. 血清热灭活的缺点?

    若实验员设错水浴温度或忘记按计时器,都会导致过高的加热温度(下图)或过长的加热时间(下图),进而大大降低血清的功能,影响细胞生长的表现。

    缺点1:

    ▲ 过高的加热温度降低大多细胞株生长速度(仅一株未受明显影响)

    缺点2:

    ▲ 过长的加热时间降低大多细胞株生长速度
    (仅一株未受明显影响)

    灭活加热过程会增加血清的沉淀状况,而沉淀又常常被认为是微雷竞技下载不了的污染,进而耗费大量时间及精力验证是否污染,导致实验一再拖延。
     

    5. 若细胞一定要使用热灭活血清怎么办?

    将需要进行处理的血清置于56℃水浴30min,建议加放空白对照(同体积水)使用温度计测温,以测得温度为56℃时为计时起始点,加热中可不时轻度旋转混匀血清。

    在灭活过程中,除了需要严格监测加热温度及认真计算时间,还有几个小技巧可以注意噢!

    灭活时,水浴槽水面与血清液面等高!

    使用水浴槽时,大多数人为避免血清瓶浮起来,会减少水浴槽内的水量,让水面降低;数据显示,降低水面也会使瓶内加热不均、拉长加热时间,增加血清破坏程度;所以还是建议将水浴槽内水量增加,让水面与血清液面等高,让血清最大面积的接触水流,提高灭活效率!

    ▲ 对比图

    至于血清瓶漂浮的问题,套上烧瓶用铅环(下图)就解决啦!

    ▲ 固定

    灭活后,使用冷水浴降温!  

    灭活后如果直接放在室温或4度冰箱冷却,仅靠空气传导散热,冷却效果差(下图),使得实际降温时间拉长,对血清的影响较大;反之,流动的冷水浴散热速度较快,冷却效果佳,缩短降温时间的同时,也减少对血清的破坏。

    ▲ 对比图


    现代血清加工技术进步,热灭活已成为非必要步骤。热灭活对细胞生长没有明显促进作用,反而会破坏血清、增加沉淀状况。除非文献指出该细胞必须使用灭活血清,一般细胞培养可省略血清热灭活步骤。

    如果必须使用灭活血清,加热时水浴槽水面高度尽量与血清液面等高;灭活后使用冷水浴取代冰箱降温,能最大程度减少对血清的破坏。直接选择购买已灭活的血清产品,也是个好选择噢!


     

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